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羊的人工受精技術(shù)

發(fā)布時間:2012-06-27

 

          人工授精技術(shù)可分兩類三種方法:第一類為液態(tài)精液人工授精技術(shù),又可分為二種方法,①鮮精或1∶2~4低倍稀釋精液人工授精技術(shù),一只公羊一年可配母羊500~1000只以上,比用公羊本交提高10~20倍以上。用這種方法,將采出的精液不稀釋或低倍稀釋,立即給母羊輸精,它適用于母羊季節(jié)性發(fā)情較明顯,而且數(shù)量較多的地區(qū)。②精液1∶20~50,高倍稀釋人工授精技術(shù),一只公羊一年可配種母羊10000只以上,比本交提高200倍以上。如江蘇省海門市,地處長江三角洲,交通便利,多年來,利用這一技術(shù),全市只有一個改良站制作高倍稀釋精液,每鄉(xiāng)鎮(zhèn)設(shè)立輸精點,實行統(tǒng)一供精,一只公羊每年配種母羊10000~15000只,精期受胎率可達90%。液態(tài)精液如果組織得不好,或在山區(qū)及交通不便而母羊較少的地區(qū),會出現(xiàn)精液用不完而浪費的現(xiàn)象。降低了精液的利用率。第二類為冷凍精液人工授精技術(shù),可把公羊的精液常年冷凍貯存起來,在任何地方、時間都可使用。如制作顆粒冷凍精液,一只公羊一年所采出的精液可冷凍10000~20000粒顆粒,可配母羊2500~5000只。精液用多少可解凍多少,不會造成浪費。但受胎率較低,高者在50%以上,低的只有30%~40%,其成本高,效果較差。

         現(xiàn)將具體操作技術(shù)分述如下:

         一、采精前的準備

         1.種公羊采精調(diào)教

         一般說,公羊采精是較容易的事情,但有些波爾山羊公羊,尤其是初次參加配種的公羊,就不太容易采出精液來,可采取以下措施:

         ①.同圈法:將不會爬跨的公羊和若干只發(fā)情母羊關(guān)在一起過幾夜,或與母羊混群飼養(yǎng)幾天后公羊便開始爬跨。

         ②.誘導法:在其他公羊配種或采精時,讓被調(diào)教公羊站在一旁觀看,然后誘導它爬跨。

         ③.按摩睪丸:在調(diào)教期每日定時按摩睪丸10~15分鐘,或用冷水濕布擦睪丸,經(jīng)幾天后則會提高公羊性欲。

         ④.藥物刺激:對性欲差的公羊,隔日每只注射丙睪丸素1~2毫升,連注射3次后可使公羊爬跨。

         ⑤.將發(fā)情母羊陰道沾液或尿液涂在公羊鼻端,也可刺激公羊性欲。

         ⑥.用發(fā)情母羊做臺羊。

         ⑦.調(diào)整飼料,改善飼養(yǎng)管理,這是根本措施,若氣候炎熱時,應進行夜牧。

         2.器械洗滌和消毒

         人工授精所用的器械在每次使用前必須消毒,使用后要立即洗滌。新的金屬器械要先擦去油漬后洗滌。方法是:先用清水沖去殘留的精液或灰塵,再用少量洗衣粉洗滌,然后用清水沖去殘留的洗衣粉,最后用蒸餾水沖洗1~2次。

         (1).玻璃器皿消毒:將洗凈后的玻璃器皿倒扣在網(wǎng)籃內(nèi),讓剩余水流出后,再放入烘箱,在115℃下消毒30分鐘。可用消毒杯柜或碗柜消毒,價格便宜、省電。消毒后的器皿透明,無任何污漬,才能使用,否則要重新洗滌、消毒。

         (2).開腔器、溫度計、鑷子、磁盤等消毒:洗凈、干燥后,在使用前1.5小時,用75%液精棉球擦試消毒。

         3.假陰道的按裝、洗滌和消毒

         先把假陰道內(nèi)胎(光面向里)放在外殼里邊,把長出的部分(兩頭相等)反轉(zhuǎn)套在外殼上。固定好的內(nèi)胎松緊適中、勻稱、平正、不起皺折和扭轉(zhuǎn)。裝好以后,在洗衣粉水中,用刷子刷去粘在內(nèi)胎外殼上的污物,再用清水沖去洗衣粉,最后用蒸餾水沖洗內(nèi)胎1~2次,自然干燥。

         在采精前1.5小時,用75%酒精棉球消毒內(nèi)胎(先里后外)待用。

         附:配制75%酒精,用購買的醫(yī)用酒精,一般為95%濃度,取其79毫升,加蒸餾水21毫升即為75%濃度的酒精。

         二、采精

         1.選擇發(fā)情好的健康母羊作臺羊,后軀應擦干凈,頭部固定在采精架上(架子自制,離地發(fā)情通一個羊體高)。訓練好的公羊,可不用發(fā)情母羊作臺羊,還可用公羊作臺羊、假臺羊等都能采出精液來。

         2.種公羊在采精前,用濕布將包皮周圍擦干凈。

         3.假陰道的準備:將消毒過的,酒精完全揮發(fā)后的內(nèi)胎,用生理鹽水棉球或稀釋液棉球從里到外的擦試,在假陰道一端扣上消毒過并用生理鹽水或稀液沖洗后甩干的集精瓶(高溫低于25℃時,集精瓶夾層內(nèi)要注入30℃~35℃溫水)。在外殼中部生水孔注入150毫升左右的50℃~55℃溫水,擰上氣卡塞,套上雙連球打氣,使假陰道的采精口形成三角形,并好氣卡。最后把消毒好的溫度計插入假陰道內(nèi)測溫,溫度在39℃~42℃為宜、在假陰道內(nèi)胎的前1/3,涂抹稀釋液或生理鹽水作潤滑劑(可不用凡士林,經(jīng)多年實踐不用任何潤滑劑,不影響公羊射精)。就可立即用于采精。

         4.采精操作

         采精員蹲在臺羊右側(cè)后方,右手握假陰道,氣卡塞向下,靠在臺羊臀部,假陰道和地面約呈35度角。當公羊爬跨、伸出陰莖時,左手輕托陰莖包皮,迅速地將陰莖導入假陰道內(nèi),公羊射精動作很快,發(fā)現(xiàn)抬頭、挺腰、前沖,表示射精完畢,全過程只有幾秒鐘。隨著公羊從臺羊身上滑下時,將假陰道取下,立即使集精瓶的一端向下堅立,打開氣卡活塞,放氣卡取下集精瓶(不要讓假陰道內(nèi)水流入精液,外殼有水要擦干),送操作室檢查。采精時,必須高度集中,動作敏捷、做到穩(wěn)、準、快。

         5.種公羊每天可采精1~2次,采3~5天,休息一天。必要時每天采3~4次。二次采精后,讓公羊休息2小時后,再進行第三次采精。

         三、精液品質(zhì)檢查

         精液品質(zhì)檢查項目很多,這里只介紹幾種常用的項目

         ①.肉眼觀察:正常精液為乳白色,無味或略帶腥味。凡帶有腐敗味,出現(xiàn)紅色、褐色、綠色的精液均不可用于輸精。公山羊正常的射精量范圍是0.5~2.0毫升,平均為1.0毫升。

         ②.精子活率檢查在載玻片上滴原精液或稀釋后的精液1滴,加蓋玻片,在38℃顯微鏡溫度下(可按顯微鏡大小,自制保溫箱,內(nèi)裝40瓦燈泡1只,既照明又保溫)檢查。精子運行方式:有直線前進運動,回旋運動和擺動三種。評定精子活率以直線前進運動精子百分率為依據(jù),通常是用十級評分法。大約有80%的精子做直線前進運動的評為0.8,有60%精子做直線前進運動的為0.6,依次類推。山羊原精液活率一般可達0.8以上。但新引進的波爾山羊第一年使用活率往往較差,原精活率只有0.6,第二年就提高了。

         在檢查(評定)精子活率時,要多看幾個視野,并上下扭動顯微鏡細螺旋,觀察上、中、下三層液層的精子運動情況,才能較精確的評出精子的活率。

         ③.密度檢查

         估測法:在檢查精子活率的同時進行精子密度的估測。在顯微鏡下根據(jù)精子稠密程度的不同。

         將精子密度評為“密”、“中”、“稀”三級、“密”級為精子間空隙不足一個精子長度,“中”級為精子間有1~2個精子長度空隙,“稀”級為精子間空隙超過2個精子長度以上,“稀”級不可用于輸精。

         精小計數(shù)法:用血細胞計算板較精確的計算出每毫升精液中的精子數(shù),在精液高倍稀釋時,要以精子數(shù)和精子活率來計算出精液稀釋倍數(shù)。計算方法是:用紅細胞吸管、 取原精液至0.5刻度處,再吸入3%的氯化鈉溶液至101刻度處,將原精液稀釋200倍。以母指及食指分別按吸管的兩端搖均,然后弄去吸管前數(shù)滴,將吸管尖端放在計算板與蓋玻片之間的空隙邊緣,使吸管中的精液流入計算室(高0.1毫米),充滿其中。計算板中央用刻線分成25個正方形大格,共由400個小方格組成,面積為1平方毫米。在200、400倍顯微鏡下數(shù)出五個大方格(四角各一個,再加中央一個大方格,共80個小方格)內(nèi)的精小數(shù)。計算時以精子頭部為準,位于大方格四邊線條上的精子,只數(shù)相鄰兩邊的精子,避免重復。數(shù)出四個大方格的精子總數(shù)后加7個。即為1毫升原精液的精子數(shù)。

         每毫升山羊精液中含精子數(shù)為10~50億,平均為30億。精子計數(shù)可10~15天進行1次。有條件的地方可用密度儀器測定。

         四、液態(tài)精液稀釋配方與配制

         1.精液低倍稀釋的稀釋液,在精液采出后,原精數(shù)量不夠時,可作低倍稀釋,密度儀器測定。滿足需要,并在短時間內(nèi)使用,稀釋液配方可簡單些。如生理鹽水;奶類稀釋液:用鮮牛、羊奶,水浴92℃~95℃消毒15分鐘,冷卻去奶皮后即可使用。凡用于高倍稀釋精液的稀釋液,都可作低倍稀釋用。

         2.精液高倍稀釋的稀釋液,不但是為了擴大精液量,而要延長精子的保存時間,配方很多,現(xiàn)介紹2個稀釋液。

         (1)葡萄糖3克,檸蒙酸鈉1.4克,EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)0.4克,加蒸餾水至100毫升,溶解后水浴煮沸消毒20分鐘,冷卻后加青霉素10萬單位,鏈霉素0.1克,若再加10~20毫升卵黃,可延長精子存活時間。

         (2)葡萄糖5.2克、乳糖2.0克、檸檬酸鈉0.3克,EDTA0.07克,三墓0.05克,蒸餾水100毫升,溶解后煮沸消毒20分鐘,冷卻后加龐慶大霉素1萬單位,卵黃5毫升。

         五、液態(tài)精液稀釋

         原精液活率在0.6以上萬可用于稀釋輸精。

         1.精液低倍稀釋,原精液量夠輸精時,可不必再稀釋,可以直接用原精直接輸精。不夠時按需要量作1∶2~4倍稀釋,要把稀釋液加溫到30℃,再把它緩慢加到原精液中,搖勻后即可使用。

         2.精液高倍稀釋,要以精子數(shù)、輸精劑量、每一劑量中含有1000萬個前進運動精子數(shù),結(jié)合下午最后輸精時間的精子活率,來計算出精液稀釋比例,在30℃下稀釋(方法同前)。

         六、分裝、保存和運輸

         精液低倍稀釋,就近輸精,把它放在小瓶內(nèi),不需降溫保存,短時間用畢。

         1.分裝保存

         (1)小瓶中保存;把高倍稀釋清液,按需要量(數(shù)個輸精劑量裝入小瓶,蓋好蓋,用蠟封口,包裹紗布,套上塑料袋,放在裝有冰塊的保溫瓶(或保存箱)中保存,保存溫度為0℃~5℃。

         (2)塑料管中保存:作者等把精液以1∶40倍稀釋,以0.5毫升為一個輸精劑量,注入飲料塑料吸管內(nèi)(剪成20厘米長,紫外線消毒),兩端用塑料封口機封口,保存在自制的泡沫塑料的保存箱內(nèi)(箱底放凍好的冰袋,再放泡沫塑料隔板,把精液管用紗布包好,放在隔板上面,固定好)蓋上蓋子,保存溫度大多在4℃~7℃,最高到9℃。精液保存10小時內(nèi)使用,這種方法,可不用輸精器了,經(jīng)濟實用。

         2.運輸

         不論那種包裝,精液必須固定好,盡可能減輕振動。若用摩托車送精液,要把精液箱(或保溫瓶)放在背包中,背在身上。若乘汽車送精液,最好把它抱在身上。

         七、冷凍精液制作技術(shù)

         制作冷凍精液,要有很多設(shè)備,好在各省、區(qū)都有精液冷凍站,可用它來兼凍波爾山羊精液,不需增加設(shè)備,有的站已經(jīng)開始冷凍波爾山羊精液,并取得較好的效果。作者等研究成功的80年代在北京市門頭溝區(qū)冷凍絨山羊精液,獲得情期受胎率73%的好結(jié)果,現(xiàn)介紹給大家,供參考。

         1.稀釋液配方與配制

         Ⅰ液 葡萄糖3克、檸檬酸鈉3克,加蒸餾水至100毫升,溶解后,水浴煮沸消毒20分鐘,冷卻后加青霉素10萬單位,鏈霉素0.1克,取80毫升加卵黃20毫升。

         Ⅱ液 ?、褚?4毫升,加甘油6毫升。

         2.精液冷凍制作

         采出的精液,檢查活率在0.6以上者即可冷凍,在30℃下用Ⅰ液(30℃)進行1∶1.5倍稀釋,包上8層紗布放在4℃冰箱中預冷降溫2~小時,在4℃下加與Ⅰ液等量的含甘油的Ⅱ液,搖勻,最終稀釋比例為1∶3倍稀釋,立即在氟板上滴凍成0.1毫升的顆粒。取本稀釋液Ⅰ液94毫升,加甘油6毫升,合成一液,就可以冷凍細管精液。

         八、母羊發(fā)情鑒定

         1.以母羊發(fā)情外部表現(xiàn)來判斷母羊發(fā)情

         本地母山羊發(fā)情外部表現(xiàn)較明顯,發(fā)情時發(fā)出叫聲,食欲減退,興奮不安,對外界刺激反應敏感,搖頭擺尾,有交配欲,喜歡接近公羊,在公羊追趕爬跨時常站立不動,讓公羊交配;陰門腫大,流出粘液。從母羊發(fā)情的外部表現(xiàn)來判斷母羊是否發(fā)情是比較容易的。但養(yǎng)羊戶往往不注意,就不能確知母羊的發(fā)情開始時間,給適時輸精造成困難。

         2.試精

         用試精公羊試情,能準確找出發(fā)情母羊,做到適時輸精。最簡便的方法是,在試情前將公羊腹部帶兜上試情布(長40~45厘米,寬35~40厘米,四角縫上25~30厘米長的帶子),每日早晨一次或早晚各一次將公羊放入母羊群中試情。當母羊接受公羊爬跨,站立不動,或母羊圍著公羊旋轉(zhuǎn),并不斷搖尾,都是母羊發(fā)情的表現(xiàn),及時把它抓出,待配。

         3.試情公羊選擇和飼養(yǎng)管理

         試情公羊必須選擇體質(zhì)結(jié)實、健康無病,性欲旺盛,動作靈敏的1~5歲公羊。試情公羊與母羊的比例以1∶30~40為宜。在配種前一個月驅(qū)蟲,加強飼養(yǎng)管理,除放牧采食或舍飼喂草外,每天補飼0.2~0.3公斤混合精料。每隔10~15天,給試情公羊排精一次,增強性欲。

         九、輸精

1.輸精時間

         適時輸精,對提高母羊的受胎率十分重要。山羊的發(fā)情持續(xù)時間為24~48小時。排卵時間一般多在發(fā)情后期30~40小時。因此,比較適宜的輸精時間應在發(fā)情中期后(即發(fā)情后12~16小時)。如以母羊外部表現(xiàn)來確定母羊發(fā)情的,若上午開始發(fā)情的母羊,下午與次日上午各輸精1次;下午和傍晚開始發(fā)情的母羊,在次日上下午各輸精1次。每天早晨1次試情的,可在上下午各輸精1次。2次輸精間隔8~10小時為好,至少不低于6小時。若每天早晚各1次試情的,其輸精時間與以母羊外部表現(xiàn)來確定母羊發(fā)情相同。如母羊繼續(xù)發(fā)情,可再行輸精1次。

         2.母羊保定

         本文介紹一種不需輸精架的倒立保定法,它沒有場地限制,任何地方都可輸精。保定人將母羊頭夾緊在兩腿之間,兩手抓住母羊后腿,將其提到腹部,保定好不讓羊動,母羊成倒立狀。用溫布把母羊外陰部擦干凈,即待輸精

         3.輸精方法

         (1).子宮頸口內(nèi)輸精:將經(jīng)消毒后在1%氯化鈉溶液浸涮過的開膣器裝上照明燈(可自制),輕緩地插入陰道,打開陰道,找到子宮頸口,將吸有精液的輸精器通過開膣器插入子宮頸口內(nèi),深度約1厘米左右。稍退開膣器,輸入精液,先把輸精器退出,后退出開膣器。進行下只羊輸精時,把開膣器放在清水中,用布洗去粘在上面的陰道粘液和污物,擦干后再在1%氯化鈉溶液浸涮過;用生理鹽水棉球或稀釋液棉球,將輸精器上粘的粘液,污物自口向后擦去。

         (2).陰輸精:將裝有精液的塑料管從保存箱中取出(需多少支取多少支,余下精液仍蓋好),放在室溫中升溫2~3分鐘后,將管子的一端封口剪開,擠1小滴鏡檢活率合格后,將剪開的一端從母羊陰門向陰道深部緩慢插入,到有阻力時停止,再剪去上端封口,精液自然流入陰道底部,拔出管子,把母羊輕輕放下,輸精完畢,再進行下只母羊輸精。

         裝在小瓶中保存的高倍稀釋精液,要用輸精器吸入后再輸精(余下精液仍在0~5℃下保存),可作子宮頸口內(nèi)或陰道輸精。液態(tài)精液情期受胎率方,80%以上。有人做過試驗,陰道輸精的情期受胎率比子宮頸口內(nèi)輸精的降低不到2%。所以說情期液態(tài)精液可以陰道輸精,而且塑料管又可代替輸精器,便于推廣應用。冷凍精液必須進行子宮頸口內(nèi)輸精,否則會降低受胎率。有條件用腹腔鏡子宮角內(nèi)輸精,能使冷凍精液受胎率提高。

         4.輸精量

         原精輸精每只羊每次輸精0.05~0.1毫升,低倍稀釋為0.1~0.2毫升,高倍稀釋為0.2~0.5毫升,冷凍精液為0.2毫升以上。

         5.冷凍精液解凍

         解凍好壞對解凍后活率有很大影響。本人采用40℃水溫解凍顆粒精液,先把小試管用維生素B12(每支含0.5毫克)沖洗一下,留一點B12,并快速在40℃水中搖動至2/3融化,取出試管繼續(xù)速搖至全部融,解凍后活率較好,可試試。   另外,建議做一個泡沫塑料小盒,倒上液氮,再把冷凍精液袋放入氮液中,這樣可避免未解凍的顆粒精液,因升溫又入液氮降溫,影響活率。

         十、所需器材、藥品、用品、表格

         1.所需器材、藥品、用品

         所需物品大部分已在文章中提到了。用于配制稀釋液的藥品、試劑:如葡萄糖要一水的、檸檬酸鈉、EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)都要分析純的,青、鏈霉素不要過期的,卵黃需新鮮雞蛋,要用不加水的鮮奶。假陰道內(nèi)胎,玻璃器皿易破損的物品要多準備一些。顯微鏡保溫箱、開膣器照明燈、精液保存箱等能自己做的盡可能自己做,在實踐中要有所創(chuàng)新。如要開展冷凍精液輸精,要配備好液氮罐。

         2.表格

         有種公羊精液品質(zhì)檢查表;母羊配種記錄表;精液使用登記表,及日常事務(wù)記錄等,各項記錄必須按時、準確填寫。是為了統(tǒng)計分析,總結(jié)經(jīng)驗,改進工作。

         十一、建立人工授精站和輸精點

         地處平川的,可象江蘇省海門市那樣全市就改良站制作高倍稀釋精液,負責統(tǒng)一供精,每個鎮(zhèn)獸醫(yī)站設(shè)一個輸精點,負責農(nóng)戶母羊輸精。地處山區(qū)的,可劃片建立人工授精站,全縣可建2~3個人工授精站,在鄉(xiāng)鎮(zhèn)或母羊多的村設(shè)輸精點。若采用冷凍精液輸精,縣里又無精液冷凍設(shè)備,人工授精站可統(tǒng)一購買冷凍精液,轉(zhuǎn)給各鄉(xiāng)鎮(zhèn)輸精點,每點配備液氮罐,由人工授精站定期到各輸精點添加液氮。有條件地地方也可購置冷凍精液設(shè)備,飼養(yǎng)波爾山羊公羊,自己制作冷凍精液,也是可以的。但不能提倡,因為我國現(xiàn)有冷凍精液設(shè)備,已夠用的了。還可在配種季節(jié),季節(jié)性的集中母羊,建立短期的人工授精站,采用鮮精或低倍稀釋精液輸精,到配種季節(jié)末結(jié)束。各地可根據(jù)具體情況,采用、創(chuàng)新。

         1.建立人工授精站的條件和基本建設(shè)

         人工授精站應建立在背風、向陽、干燥、有水源、牧草地面積大或有較多的農(nóng)田,無疾病流行史,交通便,母羊數(shù)量多,又是一縣的中心地帶,這樣便于每天送或取精液,因為高倍稀釋精液,當天精液只能當天使用,第二天使用就要降低受胎率,就得天天取送精液,設(shè)在邊遠地區(qū)就不方便了。人工授精站設(shè)有:采精室(兼作輸精室)、精液處理室(要有頂棚)、公羊圈舍、母羊圈、飼料間、獸醫(yī)室、工作人員宿舍等。

         2.建立輸精點的條件

         設(shè)在母羊較集中,交通較方便的地方,把點設(shè)在鄉(xiāng)、鎮(zhèn)獸醫(yī)站也可以,不論是用摩托車還是乘公共汽車取或送精液,在上午10時前精液必須到各輸精點,這樣單程不能超過2小時,山區(qū)最遠點距人工授精站20~30公里,平川可遠到50公里以外。各地可根據(jù)當?shù)氐木唧w條件來建點。輸精點設(shè)有:輸精室、母羊舍(供發(fā)情母羊過夜)、工作人員宿舍等。