【國(guó)際畜牧網(wǎng)】今天畜牧圈被哈獸研公布非瘟疫苗專利申請(qǐng)書這條新聞刷屏了!公告表示，經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明：獲得MGF360-505R缺失和CD2V與MGF360-505R聯(lián)合缺失的基因缺失病毒，均能提供對(duì)非洲豬瘟中國(guó)流行強(qiáng)毒株的100%免疫保護(hù)。
2018年8月，我國(guó)確診首例非洲豬瘟疫情。疫情發(fā)生后，非洲豬瘟在全國(guó)肆虐，嚴(yán)重影響畜牧業(yè)的發(fā)展。國(guó)家也把疾病研究重心放在了攻克非洲豬瘟疫苗上。而作為畜牧業(yè)最頂尖的研究機(jī)構(gòu)，哈獸研依然走在非洲豬瘟病毒研究的最前沿：
2019年3月22日，《新發(fā)病原體與感染》在線發(fā)表了中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所國(guó)家非洲豬瘟專業(yè)實(shí)驗(yàn)室的最新成果，他們成功分離出我國(guó)第一個(gè)非洲豬瘟病毒毒株(Pig/HLJ/18)。
2019年5月24日，由哈爾濱獸醫(yī)研究所自主研發(fā)的非洲豬瘟疫苗取得了階段性成果，創(chuàng)制了非洲豬瘟候選疫苗，實(shí)驗(yàn)室研究結(jié)果表明，具有良好的生物安全性和免疫保護(hù)效果。
2019年8月16日，根據(jù)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局公告，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所(中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心哈爾濱分中心)于2019年4月26日提交發(fā)明申請(qǐng)專利，發(fā)明名稱：基因缺失的減毒非洲豬瘟病毒及其作為疫苗的應(yīng)用。
公告表示，經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明：獲得MGF360-505R缺失和CD2V與MGF360-505R聯(lián)合缺失的基因缺失病毒，均能提供對(duì)非洲豬瘟中國(guó)流行強(qiáng)毒株的100%免疫保護(hù)。
重磅消息!根據(jù)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局公告，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所(中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心哈爾濱分中心)于2019年4月26日提交發(fā)明申請(qǐng)專利，發(fā)明名稱：基因缺失的減毒非洲豬瘟病毒及其作為疫苗的應(yīng)用。發(fā)明人：步志高 陳偉業(yè) 趙東明 何希君 劉任強(qiáng) 柳金雄。并于2019年8月6日申請(qǐng)公布。
公告摘要如下：
1、針對(duì)非洲豬瘟疫苗缺乏和已知疫苗的有效性不夠理想，尤其國(guó)內(nèi)疫苗的空白，研發(fā)非洲豬瘟基因缺失減毒疫苗的制備方法，并成功獲得了兩株安全、有效的疫苗株。
2、采用基因工程手段，對(duì)中國(guó)流行的非洲豬瘟分離株進(jìn)行毒力基因(CD2V和MGF360-505R)缺失，獲得了兩株缺失毒株( RASFV△360-eGFP和 RASFV△CD2V/360-eGFP-mcherry)，經(jīng)過(guò)免疫和攻毒保護(hù)效力等系統(tǒng)評(píng)價(jià)，將效價(jià)和安全性均表現(xiàn)優(yōu)異。
3、提供一種基因缺失減毒非洲豬瘟病毒，其特征在于，將基因I型的非洲豬瘟病毒進(jìn)行MGF360-505R基因缺失，或進(jìn)行CD2V與MGF360-505R基因聯(lián)合缺失而得到的。更優(yōu)選的是MGF360-505R聯(lián)合缺失是指MGF360和505R兩種基因全部序列缺失，或者CD2V與MGF360-505R聯(lián)合基因缺失是指CD2V、MGF360、505R三種基因序列全部缺失。
4、所述基因I型的非洲豬瘟病毒是中國(guó)流行株P(guān)ig/CN/HLJ/2018，其全長(zhǎng)序列已于 Genbank公開( Genbank:MK333180.1)。
5、優(yōu)選的MGF360-505R基因缺失病毒相對(duì)于原始毒株全長(zhǎng)序列缺失了第27942-35500位核苷酸;所述CD2V與MGF360-505R基因聯(lián)合缺失病毒相對(duì)于原始毒株全長(zhǎng)序列缺失了第27942-35500位和第73394-74476位核苷酸。更具體構(gòu)建的MGF360-505R基因缺失病毒，和CD2V與MGF360-505R聯(lián)合缺失的基因缺失病毒，已于2019年4月11日進(jìn)行專利程序保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)分別是 CCTCC NO:V201925和 CTCC NO:V201924。
6、還提供了包含本發(fā)明的減毒非洲豬瘟病毒的疫苗，本發(fā)明的疫苗在受試者中誘導(dǎo)針對(duì)隨后的非洲豬瘟病毒攻擊的保護(hù)性免疫應(yīng)答。
7、疫苗可以包含不同基因型的多種減毒非洲豬瘟病毒。此類疫苗可以能夠誘導(dǎo)針對(duì)多種ASF病毒基因型的交叉保護(hù)性免疫應(yīng)答。
8、還提供了包含一種或多種本發(fā)明的減非洲豬瘟病毒的藥物組合物。該藥物組合物可用于預(yù)防或治療非洲豬瘟。疫苗或藥物組合物可以包含一種或多種本發(fā)明的減毒非洲豬瘟病毒，進(jìn)一步任選地包含一種或多種佐劑，賦形劑，載體和稀釋劑。佐劑可以任何合適的佐劑，化學(xué)類免疫佐劑如氫氧化鋁、弗氏佐劑、礦物油、司鹽等;微生物類免疫佐劑如分枝桿菌、BCC、脂多糖、胞壁酰二肽、胞肽、脂溶性蠟質(zhì)D、短小棒狀桿菌;植物類免疫佐劑多為從植物或大真菌中提取的多糖類，如茯苓多糖、紅花多糖、中草藥類等。而生化類免疫佐劑如胸腺肽、轉(zhuǎn)移因子、白細(xì)胞介素等。優(yōu)選的佐劑可以是納米佐劑生物佐劑，白介素、干擾素等。
9、本發(fā)明的疫苗也可用于聯(lián)合疫苗，如與豬的其他疫苗聯(lián)合，但重點(diǎn)在減毒活疫苗上，尤其是病毒基因的整合，如雙價(jià)苗，三價(jià)苗等。聯(lián)合疫苗可以包含不同基因型的多種減毒非豬瘟病毒，如此可以誘導(dǎo)針對(duì)多種非豬瘟病毒基因型的交叉保護(hù)性免疫應(yīng)答。
10、本發(fā)明的疫苗的施用可以采用方便的途徑，例如肌內(nèi)注射，鼻內(nèi)，口服，皮下，透皮和陰道等途徑。
本發(fā)明的減毒疫苗優(yōu)選采用肌肉注射，合適的劑量為102.5-102.5TCID50，優(yōu)選劑量為103-103TCID50。
疫苗可以在初免-加強(qiáng)方案后施用。
例如，在第一次接種后，受試者可以在一段時(shí)間(例如約7，14，21或28天)之后接受第二次加強(qiáng)施用。通常，加強(qiáng)施用的劑量相同或低于初免施用的劑量。此外，也可以進(jìn)行第三次加強(qiáng)免疫，例如免疫后2-3個(gè)月、6個(gè)月或一年。
11、本發(fā)明獲得的基因缺失的減毒非洲豬瘟病毒具有下述優(yōu)勢(shì)。本發(fā)明構(gòu)建的兩株基因缺失非洲豬瘟病毒( RASFV△360-eGFP和 RASFV△CD2V/360-eGFP- mcherry)在免疫豬后，即使105 TCID50劑量免疫組動(dòng)物均無(wú)體溫升高等臨床癥狀，血液和臟器病毒分離均為陰性，存活率均為100%，表明其充分致弱，作為疫苗是非常安全的，且均優(yōu)于國(guó)外基因II型ASFV的類似研究。
國(guó)外采用我國(guó)流行株同源性極高的 Georgia株構(gòu)建了MGF360-505R基因缺失病毒，在免疫豬后的血液病毒分離陽(yáng)性率在60%以上;采用基因II型 Malawi Li1-20/1株構(gòu)建的CD2V單基因缺失病毒，在免疫豬后血液病毒分離陽(yáng)性率為100%、存活率僅為0%。其次，在有效性方面，強(qiáng)毒攻擊后，本發(fā)明構(gòu)建的 RASFV△360eGFP和 RASFV△CD2V/360-eGFP- mcherry免疫保護(hù)率均為100%，血液病毒分離陽(yáng)性率分別小于35%和100%，但在第21-22天均轉(zhuǎn)為陰性，表明兩株病毒都具有極佳的免疫保護(hù)效力，也明顯優(yōu)于國(guó)外采用基因II型ASFV的類似研究。國(guó)外MGF360-505R缺失Georgial株病毒免疫豬在攻毒后的血液病毒分離陽(yáng)性率為70%。(其中，本發(fā)明采用的103 TCID50免疫劑量小于國(guó)外的104HAD50，但攻毒后血液病毒分離陽(yáng)性率僅為25%):雖然本發(fā)明構(gòu)建的MGF360-505R和CD2V雙基因缺失病毒免疫豬在攻毒后血液病毒分離陽(yáng)性率為100%，略差于MGF360-505R基因缺失的病毒，但顯著優(yōu)于CD2V單缺失的基因II型Malawi Li1-20/1株病毒(免疫后死亡率100%)且攻毒后21天血液病毒分離就轉(zhuǎn)為陰性。最后，本發(fā)明構(gòu)建的兩株基因缺失病毒免疫后21天就能夠提供充分的強(qiáng)毒攻擊保護(hù)優(yōu)于國(guó)外的28天。因此，采用流行地區(qū)的分離株來(lái)構(gòu)建非洲豬瘟基因缺失減毒疫苗是最佳策略，也是中國(guó)研制非洲豬瘟疫苗的關(guān)鍵。因此，本發(fā)明構(gòu)建的基因缺失非洲豬瘟病毒( RASEV△360-eGFP和RASFV△CD2V/360-eGFP- mcherry)具有巨大的應(yīng)用價(jià)值。具體比較見表1.
表1國(guó)內(nèi)外類似基因缺失減毒非洲豬瘟病毒(基因II型)的安全性比較。
